Rejestracja

Please leave these two fields as-is:
UWAGA: Prosimy o rozwiązanie prostego równania matematycznego!
zamknij

Zaloguj się

Zapomniałeś hasła?

Jeżeli nie pamiętasz swojego hasła, wyślemy Ci nowe - wystarczy skorzystać ze specjalnego formularza
Przypomnij mi hasło

Zarejestruj się
Napisano: 29 lipca 2015

Liczba komentarzy: 5
Jak zrobić bufor TBE — protokół

TBE jest buforem do elektroforezy, który wykorzystuje się najczęściej do elektroforezy kwasów nukleinowych (DNA i RNA). Idealnie nadaje się do elektroforezy na żelu agrozowym, jak i na żelu poliakrylamidowym kwasów nukleinowych krótszych fragmentów DNA; najlepiej poniżej 600bp. Dłuższe fragmenty, szczególnie powyżej 1000bp, warto rozpuszczać w buforze TAE, który posiada niższą pojemność buforującą oraz wyższe przewodnictwo elektryczne od buforu TBE.

TBE jest świetnym buforem do rozdziału krótszych produktów
źródło własne, dom, publ.

W przypadku, kiedy decydujesz się na reamplifikację prążka, nigdy nie zawieszaj go w TBE (tylko, na przykład, w wodzie). TBE ze względu na zawartość w swoim składzie kwasu borowego jest inhibitorem wielu enzymów (choćby polimeraz, ligaz czy restryktaz).

JAK ZROBIĆ 10xTBE (1 litr).

Co musisz mieć:

1. Woda destylowana (zwykła lub ddH2O)

2. Tris (np. Sigma)

3. Kwas borowy (np. Sigma, Prochem).

4. EDTA (np. Sigma)

Do 750-800 ml najlepiej destylowanej wody dodaj:
108 g Tris
55 g kwasu borowego
40 ml zrobionego  wcześniej 0,5 M EDTA (pH 8.0).

Uzupełnij objętość wodą do 1000ml, przesącz, żeby uniknąć krystalizowania. Przechowuj bufor w lodówce, w zamkniętej szklanej butelce, w temperaturze od 4 do 8 °C.

Żeby przygotować 1xTBE, którego będziesz używać do elektroforezy, rozcieńcz powyższy roztwór TBE — 10 razy, czyli naprzykład 100ml odmierzonego roztworu 10xTBE dopełnij wodą do 1000ml. Pamiętaj, żeby bufor zamieszać po dopełnieniu wodą.

Nie zapominaj o tym, że EDTA rozpuszcza się w wodzie TYLKO w pH 8.0. Ostrożnie ustawiaj pH trakcie mieszania roztworu — jedna kropla NaOH, która spowoduje przekroczenie pH 8.0 sprawi, że Twój roztwór EDTA będzie do wyrzucenia a praca (i odczynniki) pójdą na marne.

image_pdfimage_print
Podziel się ze znajomymi
Skocz do formularza

Komentarze 5

  1. 1

    Szczerze nie cierpię rozpuszczania EDTA. A wy? I jeszcze pytanko, dlaczego przesączenie ma zapobiec wytrącaniu? Ja trzymam 10xTBE na stole i nic się z nim nie dzieje – wytrąca się dopiero po długim czasie, przeważnie zdążę go wykorzystać zanim się to stanie.

    6 lat temu profil
  2. 2

    Wytrąca się przedwcześnie na kłakach i brudach. Jak coś wleci, lepiej przesączyć. Zresztą sama mnie tego uczyłaś ;), 100 lat temu – ale jednak ;P

  3. 3

    Szczerze mówiąc zawsze dodaję EDTA z naważki przygotowując stock buforu- jeżeli dobrze naważy się sypkich składników, to rozpuszczą sie one bez większych oporów. EDTA nigdy nie trzymałam w postaci roztworu. Na Labracie przepis na TBE jest właśnie z naważek:
    108g Tris base/55g Boric acid/9.3g EDTA
    Moja recepta na żmudne rozpuszczanie: mieszadło magnetyczne 🙂

    Samą elektroforezę robię na SB od kiedy zostałam zreformowana przez współpracowników 🙂 Dużo lepiej się z nim pracuje w moim mniemaniu niż z TAE czy TBE. Ale to kwestia przyzwyczajeń i osobistych preferencji 🙂

  4. 4

    Jakoś nigdy rozpuszczanie EDTA nie stanowiło dla mnie problemu. Wystarczy trochę cierpliwości. I stopniowego dodawania substancji do roztworu.

    6 lat temu profil
  5. 5

    Dziwi mnie, jakie niektórym sprawia problemy robienie TBE. Ja zawsze wsypuję wszystkie składniki razem, zalewam wodą i stawiam na mieszadło – gdy mniej więcej się rozpuszczą, wstawiam do autoklawowania i bufor jest klarowny i nic się z niego nie wytrąca.

    1 rok temu
  6. Dodaj komentarz
    (wymagany)
    (wymagany)
    (wymagany)

    Pola oznaczone znaczkiem W są obowiązkowe. Musisz wypełnić wszystkie pola wymagane, aby dodać komentarz.
    Twój adres email, który podasz nie zostanie opublikowany z Twoim komentarzem.

    W treści komentarza dozwolone są tagi XHTML: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong>

do góry