Rejestracja

Please leave these two fields as-is:
UWAGA: Prosimy o rozwiązanie prostego równania matematycznego!
zamknij

Zaloguj się

Zapomniałeś hasła?

Jeżeli nie pamiętasz swojego hasła, wyślemy Ci nowe - wystarczy skorzystać ze specjalnego formularza
Przypomnij mi hasło

Zarejestruj się
Napisano: 07 kwietnia 2015

Liczba komentarzy: 0
Technika FISH — od czego zacząć?

Planujesz rozpoczęcie badań metodą FISH i nie bardzo wiesz, jak się do tego zabrać? W krótkiej serii artykułów o technice FISH przekonamy Cię, że metoda ta nie jest wcale trudna i że dzięki naszym wskazówkom bez problemu zaprojektujesz eksperyment, przeprowadzisz hybrydyzację i będziesz się cieszyć doskonałej jakości zdjęciami.

W serii tej opowiemy również o nowościach odczynnikowych, które ostatnio ukazały się na rynku i podpowiemy Wam  jakie narzędzia bioinformatyczne ułatwią Wam pracę z tą techniką.

Od czego zacząć?

Metoda FISH (ang. Fluorescence In SituHybridization) jest dość kosztowna (koszt przygotowania jednego preparatu to zazwyczaj 500-1200 PLN, niższe ceny proponuje wchodząca na rynek z sondami SureFISH firma Agilent Technologies, polski dystrybutor Perlan Technologies).

Metoda FISH wymaga stosowania zarówno bardzo precyzyjnych protokołów, jak i sprawdzonych, pewnych odczynników. Jest również narażona na błędy, które często powodują zmarnowanie nie tylko włożonej w eksperyment pracy, ale przede wszystkim stratę bardzo kosztownych sond. Dlatego, aby dobrze przygotować się do pracy z tą techniką należy przygotować odpowiedni sprzęt i odczynniki.

Potrzebne odczynniki (w zależności od protokołu i używanych sond):

potrzebne są odczynniki takie jak: ksylen do odparafinowania, etanol, bufory (w tym bufor hybrydyzacyjny i bufory płuczące), sondy, DAPI, proteaza, woda wolna od nukleaz, czasem formamid i SSC.

Materiał do badań: skrawek parafinowy, preparat mikroskopowy, utrwalone chromosomy na szkiełku podstawowym. Przechowywanie przygotowanego materiału naniesionego na szkiełko: skrawek parafinowy – temperatura pokojowa, pozostałe: -20 °C.

Potrzebny sprzęt:

— lodówka z zamrażalnikiem

— mikroskop fluorescencyjny z kamerą

odpowiednie filtry do mikroskopu (jeśli nie jesteś pewien, czy dana sonda nadaje się pod konkretny rodzaj filtra, który posiadasz — skontaktuj się z producentem sondy lub dostawcą mikroskopu). Może się zdarzyć, że filtry trzeba dokupić— w zależności od rodzaju mikroskopu filtry kosztują od kilku do kilkunastu tysięcy złotych.

— dwie łaźnie wodne

— hybrydyzator

— naczynia Coplina

— klej do dętek

— lakier do paznokci

— pudełko do przechowywania preparatów

— olejek immersyjny

— szkiełka nakrywkowe

Protokół:

— bardzo dokładny protokół i cenne wskazówki dotyczące techniki FISH można znaleźć tutaj.

– Zobacz też protokół na FISH dla EGFR: http://dolinabiotechnologiczna.pl/odczynniki/protokol-fish-na-egfr/

Metoda FISH wymaga stosowania bardzo precyzyjnych protokołów, jak i sprawdzonych, pewnych odczynników.


 

image_pdfimage_print
Podziel się ze znajomymi
Skocz do formularza

Komentarze 0

Nikt jeszcze nie skomentował tego wpisu, napisz coś!
  1. Dodaj komentarz
    (wymagany)
    (wymagany)
    (wymagany)

    Pola oznaczone znaczkiem W są obowiązkowe. Musisz wypełnić wszystkie pola wymagane, aby dodać komentarz.
    Twój adres email, który podasz nie zostanie opublikowany z Twoim komentarzem.

    W treści komentarza dozwolone są tagi XHTML: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong>

do góry