Rejestracja

Please leave these two fields as-is:
UWAGA: Prosimy o rozwiązanie prostego równania matematycznego!
zamknij

Zaloguj się

Zapomniałeś hasła?

Jeżeli nie pamiętasz swojego hasła, wyślemy Ci nowe - wystarczy skorzystać ze specjalnego formularza
Przypomnij mi hasło

Zarejestruj się
Napisano: 22 maja 2016

Liczba komentarzy: 0
Real Time PCR— sondy molekularne

W przeciwieństwie do barwników niespecyficznych (np. SYBR Green), sondy molekularne pozwalają na wysoce precyzyjną i czułą detekcję kwasów nukleinowych metodą PCR w czasie rzeczywistym. Najczęściej stosowane są oligonukleotydy (sondy TaqMan, Molecular Beacons), wykorzystujące zjawisko rezonansowego transferu energii pomiędzy dwoma fluoroforami (FRET).

W metodzie FRET (Förster Resonance Energy Transfer) fluorochrom pierwszy (zwany reporterem) w wyniku wzbudzenia falą świetlą o odpowiedniej długości, przenosi energię na fluorochrom drugi (wygaszacz), który następnie emituje kwant światła o innej długości lub powoduje wygaszenie emisji reportera.

Rodzaje sond

Pierwszymi i wciąż najbardziej popularnymi specyficznymi detektorami są sondy TaqMan — krótkie oligonukleotydy, wyznakowane dwoma fluorochromami: reporterem na 3’ końcu (np. FAM, NED) oraz wygaszaczem na końcu 5’ (najczęściej TAMRA). Odległość, pomiędzy tymi cząsteczkami jest niewielka, przez co nienaruszona sonda nie emituje fluorescencji (fluorofor 5’ końca powoduje całkowite wygaszenie emisji reportera). Dopiero podczas etapu wydłużania (po związaniu się sondy z sekwencja komplementarną) dochodzi do degradacji oligonukleotydu przez polimerazę Taq, co powoduje rozdzielenie fluoroforów i emisję światła o danej długości fali.

Musisz być zalogowany, aby mieć dostęp do pełnej treści. Zaloguj się.

Podziel się ze znajomymi
Skocz do formularza

Komentarze 0

Nikt jeszcze nie skomentował tego wpisu, napisz coś!
  1. Dodaj komentarz
    (wymagany)
    (wymagany)
    (wymagany)

    Pola oznaczone znaczkiem W są obowiązkowe. Musisz wypełnić wszystkie pola wymagane, aby dodać komentarz.
    Twój adres email, który podasz nie zostanie opublikowany z Twoim komentarzem.

    W treści komentarza dozwolone są tagi XHTML: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong>

do góry