Rejestracja

Please leave these two fields as-is:
UWAGA: Prosimy o rozwiązanie prostego równania matematycznego!
zamknij

Zaloguj się

Zapomniałeś hasła?

Jeżeli nie pamiętasz swojego hasła, wyślemy Ci nowe - wystarczy skorzystać ze specjalnego formularza
Przypomnij mi hasło

Zarejestruj się
Napisano: 25 lutego 2013

Liczba komentarzy: 0
Applied Biosystems 7500 Fast Real Time PCR System, czyli Mercedes wśród termocyklerów do analizy PCR w czasie rzeczywistym

Rynek aparatury laboratoryjnej pęka w szwach od ilości różnych aparatów przeznaczonych do amplifikacji w czasie rzeczywistym, dlatego też przed przystąpieniem do zakupu tego nietaniego urządzenia warto zasięgnąć opinii użytkowników na temat funkcji i wygody użytkowania. Przedstawiamy recenzję maszyny 7500 Fast System znanego i cenionego producenta — Applied Biosystems.

Co warto wiedzieć na początek?

Aparat ten pozwala na detekcję i kwantyfikację kwasów nukleinowych w formacie 96-dołkowym. Wykorzystując PCR pozwala na:

* ilościową detekcję docelowej sekwencji (targetu);

* jakościową detekcję targetu z użyciem analizy post-PCR (tzw. endpoint);

* jakościową analizę produktu PCR – z użyciem analizy krzywej topnienia (post-PCR).

Urządzenie zbiera surowe dane pomiaru fluorescencji z różnych punktów czasowych podczas reakcji, w zależności od rodzaju przeprowadzanego pomiaru:

* Real time:

– Krzywa standardowa

– Względna krzywa standardowa

– Porównawcze CT (ΔΔCT)

W powyższych pomiarach aparat zbiera dane po każdym etapie wydłużania w danym cyklu.

* Post-PCR (endpoint):

– Genotypowanie

– Pomiar typu „obecność/brak”

W tych pomiarach aparat zbiera dane:

– przed reakcją (w przypadku pomiaru typu obecność/brak) – zalecane, lecz  nie obligatoryjne;

– (opcjonalnie) podczas PCR;

– po reakcji.

Termocykler firmy Applied Biosystems
Applied Biosystems 7500 Fast Real Time PCR System
Aparat posiada 5 filtrów, umożliwiających wykorzystanie w reakcji następujących barwników:

Filtr 1: FAMTM, SYBR® Green

Filtr 2: JOETM, VIC®

Filtr 3: TAMRATM, NEDTM, Cy3®

Filtr 4: ROXTM, Texas Red®

Filtr 5: Cy5®

 

Co więcej, system ten pozwala na przeprowadzanie reakcji w dwóch formatach:

* 96- dołkowych płytek (MicroAmp® Optical 96-well reaction plate with barcode), do których zamknięcia używa się specjalnych taśm optycznych (MicroAmp® Optical Adhesive film);

* 8- dołkowych pasków z zatyczkami (MicroAmp® Optical 8-tube strip).

Oprogramowanie przyjazne wszystkim

System ten posiada nieskomplikowane oprogramowanie i czytelny interfejs. Opcja „Design Wizard” pozwala na zaprojektowanie pomiaru krok po kroku, prowadząc użytkownika poprzez kolejne fazy ustawień. Natomiast, w przypadku braku czasu na wpisanie danych początkowych, opcja „Quick-start” umożliwia natychmiastowe rozpoczęcie reakcji, przy możliwości uzupełnienia danych po pomiarze. Program pomaga także nowicjuszom – podaje przepis przygotowania próbek, wraz z obliczeniem stężeń reagentów. Podczas reakcji, próbki problematyczne (brak amplifikacji, szmery, nieczytelny pomiar) zostają oznaczone różnymi symbolami, dzięki czemu łatwo określić rodzaj błędu. Co więcej, program udostępnia wygodną opcję sygnalizacji końca reakcji – informacja ta może zostać wysłana do nas mailem.

Po zakończonej reakcji, wszelkie dane pomiarowe (dane surowe, wyniki po analizie) mogą zostać eksportowane do jednego pliku excell, jak również zapisane w postaci obrazka w formacie JPEG (np. krzywe amplifikacji, wykresy ekspresji genów).

Oszczędność czasu przede wszystkim

7500 Fast PCR System jak sama nazwa wskazuje umożliwia szybki pomiar – standardowa reakcja PCR z użyciem sondy TaqMan wymaga jedynie około 30 minut, przy jednoczesnym zachowaniu czułości 1 kopii, w objętości zredukowanej do 5 µl. Jest to możliwe dzięki zwiększeniu prędkości grzania bloku ( z 2,5°C na 5,5°C w jednostce czasu). Z nieco starszą wersją tego aparatu (7500 System) analogiczna reakcja zachodzi w przeciągu 2 godzin.

Co dostaniemy oprócz urządzenia

Producent oprócz dostarczenia samego aparatu wraz z komputerem i oprogramowaniem zapewnia nam kilka „drobiazgów”, takich jak początkowy zestaw 96- dołkowych płytek (lub 8- dołkowych pasków), płytki do kalibracji urządzenia (z barwnikami, sprawdzające poprawność działania wszystkich pięciu filtrów), jak również zestaw przedmiotów ułatwiających nam pracę (podkładki pod płytki, statywy na paski, przyrządy ułatwiające zamknięcie i otwarcie próbówek, czy umieszczenie taśmy optycznej na płytce). Ponadto, w cenie oferowane jest jednodniowe szkolenie przez przedstawiciela firmy.

Główne zalety

* Łatwość w obsłudze urządzenia oraz prostota oprogramowania;

* Możliwość pomiaru fluorescencji o różnej długości fali (5 filtrów wzbudzenia i 5 filtrów emisji);

* Różnorodność zastosowań – pomiary typu: krzywa standardowa, względna krzywa standardowa, porównawcze CT, dyskryminacja alleliczna, obecność/brak;

* Możliwość szybkiej reakcji PCR oraz zredukowania objętości próbki do 5 µl;

* Możliwość przeprowadzania multiplex real time PCR (do 5 różnych targetów w ramach jednej próbki).

Główne wady

* Przystosowanie urządzenia do innych produktów A. Biosystems (wszelkiego rodzaju probówki, odczynniki) – jakościowo bardzo dobre, lecz drogie;

* Cena – średni koszt zakupu urządzenia to 100 000 zł, do tego dodać należy wysoki koszt jego utrzymania;

* Oprogramowanie nie jest kompatybilne ze starszymi wersjami Windows®, jak również spowalnia pracę niektórych komputerów (opinia stałych użytkowników..).

 

AM

image_pdfimage_print
Podziel się ze znajomymi
Skocz do formularza

Komentarze 0

Nikt jeszcze nie skomentował tego wpisu, napisz coś!
  1. Dodaj komentarz
    (wymagany)
    (wymagany)
    (wymagany)

    Pola oznaczone znaczkiem W są obowiązkowe. Musisz wypełnić wszystkie pola wymagane, aby dodać komentarz.
    Twój adres email, który podasz nie zostanie opublikowany z Twoim komentarzem.

    W treści komentarza dozwolone są tagi XHTML: <a href="" title=""> <abbr title=""> <acronym title=""> <b> <blockquote cite=""> <cite> <code> <del datetime=""> <em> <i> <q cite=""> <s> <strike> <strong>

do góry